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超敏型 ECL化學發光底物試劑盒

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品牌: 炎熙生物
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所在地: 上海
有效期至: 長期有效
最后更新: 2018-04-20 18:01
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產品詳細說明
 超敏型 ECL化學發光底物試劑盒

Super-sensitive Enhanced Chemiluminescence Substrate Kit

 

試劑盒組成:

貨號

組份

數量

ECL-P-100

A 液

50mL

B 液

50mL

說明書

1 份

ECL-P-500

A 液

250mL

B 液

250mL

說明書

1 份

 

儲存:避光保存,室溫可保持穩定兩年以上;長期不用,建議置于4 ºC保存延長有效期。

 

一、產品簡介

本試劑盒是化學發光系統,用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸,靈敏度高,背景低,最低檢測靈敏度可達高飛克(femtogram)級,適用于檢測痕量蛋白或核酸。發光信號持久,所采用的獨特配方足以維持6小時以上的發光,便于反復曝光操作。與普通 ECL 化學發光底物相比,可明顯減少一抗和二抗的使用量。

 

二、原理:

超敏型ECL化學發光底物試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體、抗原或者核酸。蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上,以HRP標記的抗體或探針結合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于用本產品配制的ECL工作液中,室溫孵育數分鐘,HRP使工作液中的魯米諾(Luminol)氧化并發光,試劑中添加的增強劑可以使得這種發光大大增強。此光經X光膠片或者電子裝置感光記錄下來,可清晰顯示蛋白質或核酸條帶。

 

三、產品優點:

高飛克級靈敏度——高靈敏性,能快速檢測更廣泛的蛋白范圍,最低可檢測約300飛克的蛋白量。

信號穩定——發光時間長,能進行多次曝光,30min后仍可維持約90%的發光強度,6小時后仍能維持60%以上的發光強度。

信號強——發光信號比對碘苯酚增強的 HRP-魯米諾檢測體系更強。

穩定性高——試劑盒可在室溫長期穩定存放。

節約抗體——需要更少(稀釋更多)的一抗和二抗,特別節省抗體(推薦用量:一抗0.02-1.0 μg/mL,二抗4-20 ng/mL)。

 

四、使用方法:

1. 印跡膜制備:執行常規電泳、轉膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發光底物,檢測系統必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。

2. ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均勻并盡快使用;將膜片置混合液中,于室溫下孵育約1分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片,注意不要在膜片表面形成氣泡。

3.蛋白或核酸信號顯現:

1). 用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑,僅留下少量液體覆蓋表面,不可讓膜完全干燥;

2). 將膜片置于保鮮膜上,吸附蛋白面朝上,小心趕盡氣泡;

3). 用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光;

4). 根據信號強弱適當調整曝光時間,也可選擇不同時間多次曝光,以取得最佳效果。

 

五、安全性:

無特殊毒性,按普通化學品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸,請立刻用大量清水沖洗。

 

六、注意事項:

1.由于不同品牌的抗體質量不同,以及抗體的保存條件和保存時間的不同,初次使用時建議對抗體用量進行優化,以取得最優效果。

2.勿將ECL化學發光底物試劑盒暴露在陽光或強光下,否則會導致其失活;建議保存在棕色瓶中,并避免長時間暴露在陽光下,實驗室光照對試劑盒影響不大;除了X光膠片曝光和洗片處理外,所有步驟均不必在暗室中操作。

3.使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜,以確保印跡膜處于濕潤狀態;使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。

4.使用前配制ECL工作液,體積足夠覆蓋膜片即可;取A液和B液時一定要用不同的槍頭,互相污染可能導致緩慢失活;配制完畢建議立即使用工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低;棄去使用過的混合試劑;

5.印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時發出的光最強,然后隨著時間的延長而緩慢減弱,至30 min仍可保持90%的光信號,至24小時仍可保持約60%的光信號;蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間;使用過少的ECL工作液不利反應進行,為達節約目的可將膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。

6.使用生物素/親和素體系時,避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素,容易產生非特異性信號。

7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8. 金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現顆粒狀斑點,避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子,建議使用塑料的平頭鑷子。

9.疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,應避免使用NaN3,如必須使用,濃度不要超過0.01%。

10. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干凈。

11.本產品僅供研究使用。
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